I "Assassin's Creed: Brotherhood" følger vi mesterdrapsmannen Ezio Auditore da Firenze i hans søken etter hevn mot Tempelridderne. Etter at familien hans ble forrådt av de hensynsløse adelsmennene i renessanse-Italia, sverget den unge Ezio å gjenvinne æren til da Firenze-navnet for enhver pris. Gjennom å mestre Assassinenes kunster, kjemper han med både sinn og kropp, og står til slutt overfor en skjult ondskap. Men hans seiere er kortvarige... For makten til de fryktede Tempelridderne er fortsatt intakt. Fiendene til Brorskapet har nå blitt klar over trusselen Ezio utgjør mot dem og deres planer om å kaste verden inn i skyggenes mørke. Igjen må Ezio balansere på knivseggen mellom å beskytte uskyldige liv og å eliminere alle som står i veien for ham.
